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层析柱装柱流程-层析柱装柱注意事项

浏览 134次发布时间:2024-01-30 

本文目录一览表:

  • 一、以离子交换色谱法为例,简述湿法装柱的操作过程和注意事项
  • 二、请问什么叫装柱它是一个什么过程请给出定义,谢谢了,急急急急急急~~~~~~~~
  • 三、急需:如何制备硝酸银-硅胶柱层析柱,不是薄层板?详细点
  • 四、层析柱原理和使用方法
    • 一、以离子交换色谱法为例,简述湿法装柱的操作过程和注意事项

      1.样品处理:对被分离样品有时要经过水解等化学处理,样品溶液一般要兼顾到浓度与粘度两方面。
      + B4 ^: J i3 _) \- T: R/ |” v2.离子交换柱的安装:层析柱内径必须粗细均匀,柱管大小可据实际需要选择。柱下端胶塞中插入一放液管,胶塞上盖以园形尼龙绸或发泡塑料片以防止交换树脂流出。
      + H/ 0 X, d’ E2 P8 h S- U3.装柱:⑴装柱质量是确保柱层析分离效果的技术关键之一,越是高技术层析(如使用毛细管层析柱的高级层析设备)装柱的技术要求和难度越高,以至手工操作很难达到。⑵装柱的质量要求,无论是手工、机械、自动化装柱都是一样的,要求装入柱中的分离载体材料松紧适度,分布均匀,无气泡、无断层、无结节,能保持正常的形态和结构;⑶装入柱中树脂的高度与直径之比因分离对象和分离目的不同而相差很大,本教材推荐的洗脱柱装柱高度是柱径的4~6倍。⑷操作次序,以手工装入溶胀的D254树脂(湿法装柱)为例,其操作程序可概括为:①查连接(柱与塞之间、上下塞与进出液管之间、梯度混合器与进液管之间、出液管与收集器之间等等的连接是否正确、紧密),②试止漏(塞子、接头、活塞开关处在长时间满负荷下不泄漏),③加隔离缓冲垫(紧贴于柱子下端塞子的内平面),④加少许平衡液于空柱内,⑤赶气泡(缓冲垫内和出水管中的气泡),⑥开通放水开关,⑦与放水量保持相当的流速,向柱内匀速加完载体材料浆,⑧关闭放水开关,令树脂自然下沉,⑨用洗涤液和清水洗涤树脂,⑩最后用过柱和平衡柱,使树脂结构平衡稳定,⑾在树脂表面盖上一片尼龙或泡膜塑料,并与柱子内壁保持严密接触,以防加样时树脂泛起。
      ( 6 Y, g6 D5 S2 e- z% v b* m4.加样:缓缓打开柱子下端的放液开关,使柱内液面刚好降至树脂面时便立即将样品溶液小心地加到尼龙或泡膜塑料片上,待样品液面刚好进入树脂层内便立即加入少许平衡缓冲液,以清洗粘附在覆盖层中的样品,并随之进入树脂层。当柱内液位接近树脂表面时便立即添加洗涤液进行洗涤操作。$ o+ c9 M: n3 `% Q
      5.洗涤:选用合适的洗涤液、恰当的总用量及洗涤流速,小心洗涤柱内树脂,以除去不被离交树脂吸附的杂质。: K0 s* j/ p; W4 d) o7 W6 _
      6.洗脱:由洗脱曲线找出洗脱液的最佳浓度和适当的总量、操作压及流速进行洗脱。
      5 m- U F# X! m’ M. O# g! |7.监测:用敏感快速的方法(参见下文“测定”)监测分离成分是否洗脱出来以及洗脱峰的分布
      9 v2 C$ h- _- \: S8.收集:一旦发现待分离成分洗脱出来便可进行一步或分步收集,并可根据各成分洗脱峰的轴向分布和浓度监测,决定产品收集浓度区段,弃去的洗脱液可循环用于相同成分的洗脱。
      1 v7 I2 v8 H, m8 y3 ] M; J8 m9.沉淀/离心:用沉淀剂可将分离组分沉淀或离心下来脱水干燥,沉淀剂回收再用。
      ” a3 @7 z0 a’ t10.脱水干燥:加入适当脱水剂为如、丙酮或乙醚脱水后进一步干燥。5 _” H” J” X0 e% v” V
      11.测定:对层析所得产品可称重或测定活性计算其得量和收率。. ^7 ]4 x, e- `1 p# y- z. d7 g9 m5 `
      【注意事项】4 G; U! }* `$ X7 C” b: b0 f
      1.应根据被分离物质的理化性质、分子大小、分子形状和分离的目的要求,选择分离效果好、交换容量大而机械强度较高的分离载体材料。市售的分离载体有明确的、理化性质、功能作用、活化再生和保养存放等技术参数资料可供用户选择。
      * K7 Q, U. T% x8 y5 R2.应根据分离纯化的对象、规模选择层析柱的长短、粗细、柱高与内径之比,使达到最佳分离效果;此外,柱子材料的要稳定、透明,内径要均一、光滑,死腔要愈小愈好,要有利于紧固、连接、装柱与维护。
      4 E F! k7 Q. W3 [ s/ k( – P3.柱子安放要垂直、稳固,与之相连的各种线路、管道、设备、设施的布局和连接要紧奏,要方便操作、观察与维护。4 F5 w( v8 w+ c4 C
      4.要求装入柱中的分离载体材料松紧适度,分布均匀,无气泡、无断层、无结节,能保持正常的溶胀形态和结构。5 F n1 O% }8 d z+ T0 L# t2 |3 C
      5.保持柱内树脂层面平整、层序结构始终如一是确保柱层析分离效果的又一技术关键。为此,从装柱到洗脱结束的过程中,尤其是加样、洗涤、洗脱过程中要始终保持柱内液位不低于柱内树脂的顶部平面,尤其要始终保持柱内树脂的层序结构始终如一,不被打乱,特别要防止更换浓度不同的洗涤洗脱液时发生“翻缸”而搅乱树脂层结构,“压缸”而造成柱层断裂和梗塞断流。
      7 z/ W” C+ E8 q: i t g6.注意保持一定的操作压,这对确保层析柱流速和分离效果十分重要。因为流速不仅与洗脱液加在柱上的压力(因液面差造成)有关,也与装柱材料的粒度、交联度、机械强度有关。应针对具体情况建立一个操作压、流速和分离效果的最佳平衡点。
      ; N( j K7 n0 T” {9 [$ S6.显著标明各种洗涤、洗脱液的技术参数,严禁乱用和混用。) M) k” o* {2 g( F
      7.制作洗脱曲线,确定洗脱液收集方案,设置洗脱监控点。2 N; I* F% \6 e9 I5 J% X1 V
      8.注意剔除破损树脂,及时补足流失、破损的循环树脂量。
      # S5 F F8 K3 V2 ]9 A1 E6 U+ o9.严格掌握新、旧树脂的活化、再生条件,及时再生旧树脂。$ h4 U9 m: L5 L7 g
      树脂的再生:每次洗脱结束,用清水将树脂洗出柱体再用、再生,或用高浓度的NaCl溶液浸泡贮存。树脂经过一段使用后树脂上的活性基团因被交换而使交换容量大为降低,此时树脂需要再生处理。( z# |! T+ @) z” O
      大处理(酸—碱—酸):加入树脂2倍量的2mol HCL溶液搅拌3小时,自来水冲洗至中性;又用2mol NaOH溶液照酸处理方式处理;再用2mol HCL处理。
      5 F% O1 U$ W2 r小处理(碱—酸):浓度、方法同上。) o4 @’ Y” x8 ]8 s2 {8 P6 i
      连续用数次的树脂进行小处理,用十次后的树脂要进行大处理。
      4 {, T2 J( F L C: a- C% E g$ X9 v10.注意脱水干燥条件。$ M) H0 {1 @ q’ Y9 j” t7 n1 x

      二、请问什么叫装柱它是一个什么过程请给出定义,谢谢了,急急急急急急~~~~~~~~

      在进行柱层析分离提纯时,将柱填料(也叫固定相)装入分离柱的过程就叫装柱。装柱有两种方式:干法和湿法。

      层析柱原理和使用方法

      三、急需:如何制备硝酸银-硅胶柱层析柱,不是薄层板?详细点

      10%硅胶的制备:
      层析用硅胶(0.154-0.098mm粒径)处理:将约300g硅胶装入层析柱内,分别用1000mlL甲醇、500mL
      淋洗后,通氮气将其吹干,在30℃
      烘干12h
      ,550℃
      焙烧6h
      ,冷却至150℃
      ,取出放入干燥器中冷却,装入试剂瓶密封保存。
      10%硝酸银-硅胶:取上述层析用硅胶90g
      ,逐滴加入400g/L
      的AgNO3
      溶液28g
      ,边加边振荡至无结块。待30min后,
      30℃烘8h
      ,180℃

      12h。将所制成的硅胶放入试剂瓶中密封,保存在干燥器中备用。
      装柱方法:
      柱子可以分为:加压,常压,减压
      压力可以增加淋洗剂的流动速度,
      减少产品收集的时间,
      但是会减低柱子的塔板数。所以其他条件相同的时候,常压柱是效率最高的,但是时间也最长,比如天然化合物的分离,一个柱子几个月也是有的。减压柱能够减少硅胶的使用量,但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发以及有些比较易分解的东西可能得不到,而且还必须同时使用水泵抽气。

      四、层析柱原理和使用方法

      柱层析技术又称柱色谱技术,主要原理是根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同,经多次反复分配将组分分离开来。

      柱层析操作时,先在圆柱管中填充不溶性基质,形成一个固定相。将样品加到柱子上,用特殊溶剂洗脱,溶剂组成流动相。在样品从柱子上洗脱下来的过程中,根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同,经多次反复分配将组分分离。

      装柱子(添硅胶)时,有两种方法:即湿法装柱和干法装柱,二者各有优劣。不论干法还是湿法,硅胶(固定相)的上表面一定要平整,并且硅胶(固定相)的高度一般为15cm左右,太短了可能分离效果不好,太长了也会由于扩散或拖尾导致分离效果不好。

      装柱方法

      湿法装柱是先把硅胶用适当的溶剂拌匀后,再填入柱子中,然后再加压用淋洗剂走柱子,本法最大的优点是一般柱子装的比较结实,没有气泡。

      干法装柱则是直接往柱子里填入硅胶,然后再轻轻敲打柱子两侧,至硅胶界面不再下降为止,然后再填入硅胶至合适高度,最后再用油泵直接抽,这样就会使得柱子装的很结实。接着是用淋洗剂走柱子,一般淋洗剂是采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。

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